生物制藥領域的浪潮，從單抗、雙抗、ADC 等抗體藥物的研發(fā)拓展到基因治療和細胞治療，以及現(xiàn)在異�；馃岬� mRNA 疫苗領域和寡核苷酸藥物等。
聚乙烯亞胺（PEI）是一類陽離子聚合物轉染載體，在基因治療方法開發(fā)與生產中，可通過瞬時基因表達生產重組蛋白質，還可以在貼壁細胞系中用于病毒載體生產（腺相關病毒、慢病毒、腺病毒等）。具有基因轉染效率高，易于從溶酶體中逃逸等優(yōu)點。但是 PEI 具有一定的毒性，其不易在體內生物降解的缺點受到了研發(fā)人員的關注，因此大家會嚴格控制 PEI 在基因治療制劑中的殘留，將潛在的風險降到最低。為了滿足大家對 PEI 痕量殘留監(jiān)控的急切需求，我們開發(fā)了 HPLC-ELSD 方法準確定量分析制劑中轉染劑 PEI 的殘留。
什么是 PEI？
PEI 是水溶性高分子聚合物的化學結構，沒有顯著的紫外吸收的基團，且?guī)в写罅康恼姾�。基于此特性，安捷倫推出液相色譜-蒸發(fā)光散射（HPLC-ELSD）聯(lián)用技術，適用于分析無法通過紫外檢測器進行測定的半揮發(fā)性及非揮發(fā)性化合物，特別是對于缺乏紫外吸收基團且不易揮發(fā)的 PEI 有較高的靈敏度和較好的重現(xiàn)性。
實驗樣品分析
準備 PEI 的對照品溶液，可以看到不同分子量的 PEI(PEI-25kDa和PEI-40kDa)在安捷倫 Poroshell HPH-C18 色譜柱上均有較好的保留。
PEI 為了準確定量實際樣品溶液中 PEI 的殘留，我們配制了一系列不同濃度的 PEI 對照品溶液，繪制標準曲線。
在此色譜條件下，PEI 在 ELSD 檢測器上有較高的靈敏度，濃度 0.001 mg/mL，可以得到 S/N=42，完全滿足測定制劑中痕量 PEI 殘留的要求。
在實際樣品分析過程中，制劑中含量較高的緩沖鹽，以及前處理后殘留的其他物質在色譜柱上沒有保留，在死時間出峰，而 PEI 與色譜柱具有較強的作用力，通過快速的有機溶劑梯度變化進行洗脫，可以得到很好的分離，PEI 的加標回收率在 90%-110%之間。
該方法分離度好，靈敏度高，具有良好的線性關系、精密度和準確度，保留時間和峰面積的 RSD 分別在 0.1%和 1.6%范圍內。
利用上面的 HPLC-ELSD 分析方法，可以很好地滿足目前對制劑中痕量 PEI 殘留的分析，同時考慮到實際樣品基質比較復雜，在色譜柱之后和 ELSD 之前，安裝多功能閥，通過軟件設置切換時間，將 4min 之前高濃度基質切換到廢液中，4min 之后待測 PEI 切到 ELSD 中進行檢測。既準確測定了痕量 PEI，又避免了基質污染 ELSD 檢測器，保證了該方法的重現(xiàn)性。
推薦儀器
HPLC-ELSD 聯(lián)用技術采用全新 1290 Infinity II ELSD 檢測器，包括特殊光電倍增管以及激光器件，使其在靈敏度提高的同時，動態(tài)范圍提高 90 倍，而且其獨特的高精度玻璃噴頭設計為峰面積重現(xiàn)性提供了保證。
液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測器
出色的靈敏度
最新的 1290 Infinity II ELSD 檢測器配置性能出眾的激光光源，靈敏度比常規(guī) ELSD 高出 10 倍，更適用于痕量分析。
極佳的穩(wěn)定性
經過優(yōu)化的安捷倫 ELSD 檢測器具有出色的穩(wěn)定性，使大部分分析物獲得優(yōu)異的重現(xiàn)性，提供可靠、準確的分析結果。
結語
與此同時，為滿足國內迅速發(fā)展的生物制藥行業(yè)對輔料、工藝殘留和遞送載體等分析提出的更高要求，安捷倫應用實驗室開發(fā)出一系列解決方案，包括 mRNA 疫苗和寡核苷酸藥物遞送載體的分析，治療性蛋白藥物制劑中表面活性劑吐溫 20 或吐溫 80 、穩(wěn)定劑泊洛沙姆 188、凍干保護劑蔗糖、氨基酸等輔料成份的分析；以及消泡劑（二甲基硅油）和裂解劑（Triton X-100）等生產工藝殘留分析。
