地西泮別名安定、苯并二氮卓、苯甲二氮卓，是一種中樞精神系統(tǒng)鎮(zhèn)定劑，主要用于人和動(dòng)物鎮(zhèn)定催眠及癲癇的治療。近年來，地西泮在臨床的應(yīng)用越來越廣泛，此類藥物在中毒藥物中居首位，中毒和疑似中毒的病例常見，所以建立一種高效、快速的定量流程及檢測(cè)方法尤為重要。本文使用SPE1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)對(duì)血清中的地西泮進(jìn)行固相萃取、富集，用高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)。

       本文參考《SPE-HPLC/MS/MS法檢測(cè)人唾液中的地西泮及其代謝產(chǎn)物》采用SPE1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)，測(cè)定地西泮的回收效果，實(shí)驗(yàn)證明，地西泮回收率在90.5%~98.1 %之間，重現(xiàn)性RSD為2.7 %，回收率和重現(xiàn)性良好，說明SPE1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)可靠、穩(wěn)定，適用于血液中的地西泮樣品前處理。

       1、實(shí)驗(yàn)過程

       1.1儀器與試劑

       SPE1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)（萊伯泰科公司）；

       LC600高壓高效液相色譜儀（萊伯泰科公司）；

       LC600高壓高效液相色譜儀（萊伯泰科公司）；

       地西泮，1000mg/L，壇墨質(zhì)檢；

       甲醇（色譜純）；

       乙酸銨（分析純）：配制成0.2mol/L，PH=6的水溶液；

       C18固相萃取柱（60mg/3mL萊伯泰科）；

       實(shí)驗(yàn)用水：超純水。

  

       1.2 標(biāo)準(zhǔn)工作液的配置

       取1mL地西泮標(biāo)品于10mL容量瓶中，甲醇定容，配置成濃度為100μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。

取20 μL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，用甲醇定容到1mL，配制成2μg/mL標(biāo)準(zhǔn)工作液。

 

       1.3實(shí)驗(yàn)方法

       1.3.1 樣品制備

       取1mL血液，加入100 μL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，混勻，使血樣中地西泮的加標(biāo)濃度為200 μg/L，用水稀釋到5 mL，渦旋5min，5000 rad/min離心10 min。取全部上清液，待固相萃取處理。

       同時(shí)做樣品空白。

 

       1.3.2 固相萃取及濃縮

       進(jìn)行SPE1000方法編輯，并加載方法到相應(yīng)通道，進(jìn)行樣品的固相萃取。收集洗脫液到收集瓶中，氮吹濃縮至1mL以下，用甲醇定容至1mL，待測(cè)。

 

       1.3.3 HPLC測(cè)定水中地西泮

       色譜柱：C18，5μm，4.6mm*150mm；

       波    長：230nm；

       流    速：1.0mL/min；

       進(jìn)樣量：20μL；

       流動(dòng)相：甲醇：水=65:35V/V

 

       2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

       2.1  地西泮色譜圖

       2.1.2血液中地西泮加標(biāo)樣品色譜圖

       2.1.3血液中地西泮樣品色譜圖

 

       2.2 HPLC測(cè)定血液中地西泮回收率

       HPLC測(cè)定血液中地西泮回收率計(jì)算結(jié)果如下表，萃取富集后的回收率在90.5%~98.1 %之間，重現(xiàn)性RSD為 2.7%。

 

      3、實(shí)驗(yàn)結(jié)論

       1、254nm和230nm的波長均可檢測(cè)到地西泮，但地西泮在230nm波長下，信號(hào)響應(yīng)最高。

       2、SPE1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)凈化的樣品，其回收率和重現(xiàn)性良好，工作效率高，可應(yīng)用于此類樣品的前處理方法中。

 

       4、參考標(biāo)準(zhǔn)

       SPE-HPLC/MS/MS法檢測(cè)人唾液中的地西泮及其代謝產(chǎn)物

       高效液相色譜法測(cè)定 地西泮中毒患者血漿與血清中地西泮濃度

       固相萃取—反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定人血清中地西泮及氯硝西泮