貝克曼PEG濃縮法
PEG濃縮法
聚乙二醇（polyethylene glycol，PEG）是一種無電荷的線性分子結(jié)構(gòu)的多糖，為乙二醇的聚合物，具有高親水性，在溶液中會(huì)吸收大量水分，減少病毒之間的距離，使病毒聚合在一起，提高病毒的相對(duì)濃度，達(dá)到沉淀濃縮的目的。
基本流程：
1.收集病毒上清液，使用0.45 μm濾膜過濾，除去細(xì)胞及細(xì)胞碎片。
2.將上清液與40% PEG溶液混合（可使用PEG8000、4000或6000），最終PEG濃度為10%。冰上放置3到6小時(shí)。
3.放于Avanti J-15R離心機(jī)中，2000 ×g 離心30 min。
4.去掉上清，使用1/20原始樣品體積的PBS緩沖液對(duì)離心后形成的沉淀進(jìn)行重懸。
5.為了進(jìn)一步濃縮，將重懸后的病毒樣品轉(zhuǎn)移到已預(yù)先消毒的超速離心管（Ultra-Clear Tube #344058）中，并使用PBS緩沖液進(jìn)行配平。
（注：可選用無菌無酶離心管 #C14292）
6.按次序?qū)⒊匐x心管放置于SW 32 Ti的吊桶中。
7.將裝有病毒樣品的SW 32 Ti轉(zhuǎn)頭放置于Optima XPN-100超速離心機(jī)中，100,000 ×g（24,500 rpm）離心90 min。
8.直接傾倒或使用移液器小心去除上清，注意不要將病毒顆粒倒出。
9.使用PBS或其他病毒存儲(chǔ)液重懸沉淀，并將所有管中的樣品集中在一個(gè)離心管中。
10.集中的病毒樣品分裝后，-80℃保存?zhèn)溆谩?/div>
蔗糖墊液離心法
為更好地保持病毒顆粒形態(tài)與結(jié)構(gòu)的完整性，超速離心濃縮時(shí)經(jīng)常在管底加入蔗糖墊液，使病毒樣品在到達(dá)管底時(shí)沉降減速或不形成沉淀。
基本流程：
1.收集病毒上清液，使用0.45 μm濾膜過濾，除去細(xì)胞及細(xì)胞碎片。
2.在已預(yù)先滅菌的超速離心管（Ultra-Clear Tube #344058）底部小心加入3-5 ml 20%蔗糖墊液。
（注：可選用無菌無酶離心管 #C14292）
3.小心地將病毒上清液加至離心管中蔗糖墊液上。
4.將超速離心管配平后小心放入吊桶中。
5.將裝有病毒樣品的SW 32 Ti轉(zhuǎn)頭放置于Optima XPN-100超速離心機(jī)中，4℃，125,000 ×g離心90 min。
6.直接傾倒或使用移液器小心去除上清，注意不要將病毒顆粒倒出。
7.加入PBS或其他病毒存儲(chǔ)液重懸沉淀，可選擇在4℃下溶解2小時(shí)，每20分鐘輕輕震蕩。
8.對(duì)離心得到的病毒樣品進(jìn)行分裝，-80℃保存?zhèn)溆谩?/div>
Optima XPN-100
最高轉(zhuǎn)速：100,000 rpm
最大相對(duì)離心力：802,400 ×g
15寸液晶顯示屏
內(nèi)置離心專家軟件
SW 32 Ti 水平轉(zhuǎn)頭
最高轉(zhuǎn)速：32,000 rpm
最大相對(duì)離心力：175,000 ×g
最大容量：6 × 38.5 mL
安全、高效的插入式轉(zhuǎn)頭
(責(zé)任編輯：金利儀器lyh)
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